熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：探針法熒光定量PCR試劑盒和染料法熒光定量PCR試劑盒。而熒光定量PCR的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物；而非特異性檢測方法是在在PCR反應體系中，加入過量熒光染料，熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射出熒光信號。前者由于增加了探針的識別步驟，特異性更高，但后者則簡便易行。

　　染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項：

　　1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。

　　2. 試劑若低溫保存，易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間，也可在溫水水浴中預熱十分鐘，以溶解沉淀，混勻后再使用。

　　3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶，影響實驗結果。

　　4. 建議擴增片段長度1kb以內，以便擴增效率佳。

　　5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。