原代細胞來源于活體或是新近死亡的供體,通過機械或酶方法解離獲得,其方案根據(jù)來源物種(例如人,小鼠)和所涉及的組織類型而變化。通常包含以下步驟:組織切割和切碎,酶解,反復洗滌,研磨和微濾分餾,后重新懸浮和接種收集的細胞群。對于松散的、被纖維結締包圍的組織,機械均質化可能足以進行解離。如果您的組織來源是外周血,差速離心便可以分離目的細胞。
原代細胞培養(yǎng)的應用:
1、為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段;
2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;
3、服務于臨床實踐,用于藥物篩選等。
原代細胞培養(yǎng)之后分離需要注意的地方:
1、原代培養(yǎng)的分離細胞在初次接觸體外環(huán)境時,它們之間會互相影響,在這些細胞之間能產生一些促生長的活性物質,使細胞彼此互相促進存活和生長。如果接種的細胞密度過低,細胞之間的促生長作用很小,也很難使細胞適應從體內的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程。如果接種的細胞密度過大,會導致營養(yǎng)物質供應不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。
2、適當增大原代培養(yǎng)接種的細胞密度,給培養(yǎng)的細胞提供更多的類似于在體內時細胞之間的相互作用,會極大提高原代培養(yǎng)的細胞在體外存活率。待細胞適應體外環(huán)境后進行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng)。
3、盡快使接種的細胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關鍵??梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內培養(yǎng)3h到5h,待細胞貼壁后,再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。