探針法熒光定量PCR試劑盒是使用探針法進(jìn)行qPCR實(shí)驗(yàn)的即用型優(yōu)化預(yù)混液。實(shí)時(shí)定量PCR是通過產(chǎn)物發(fā)出熒光,根據(jù)熒光強(qiáng)度來定量的。激發(fā)熒光的方式有熒光染料法和探針法。熒光探針比熒光染料更具特異性,可檢測(cè)特定序列的擴(kuò)增產(chǎn)物的量。熒光染料可以檢測(cè)PCR中獲得的全部雙鏈DNA,但不能區(qū)分不同的雙鏈DNA。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,本產(chǎn)品只適用于科研根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。
技術(shù)原理:DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。
探針法熒光定量PCR試劑盒具有下列特點(diǎn):
1.提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
4.特異性高,引物是根據(jù)小反芻獸疫病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.本產(chǎn)品足夠52次20μL體系的探針法熒光定量RT-PCR反應(yīng)。
6.本產(chǎn)品只能用于科研。