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ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置

更新時(shí)間：2017-08-04　點(diǎn)擊量：1001

ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置？zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn)，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/span>
1、ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液
2、ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液
3、ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液
4、ELISA實(shí)驗(yàn)終止液
5、ELISA底物緩沖液
6、ELISA實(shí)驗(yàn)TMB四甲基聯(lián)苯胺、使用液
7、ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液
8、ELISC

試劑

1、ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液)：

NaHCO31.59g
NaHCO32.93g
加蒸餾水至1000ml


2、ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M

KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H2O2.9g
NaCl 8g
KCl0.2g
Tween-20 0.05%0.5ml
加蒸餾水至1000ml


3、ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

4、ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(2M H2SO4)：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸98%、21.7ml。

5、ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸)：

0.2M Na2HPO4(28.4g/L) 25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2g/L)24.3ml
加蒸餾水50ml


6、ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液：

TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
底物緩沖液(PH5.5)10ml
0.75%H2O2 32μl


7、ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液：

ABTS0.5mg
底物緩沖液(PH5.5)1ml
3%H2O22μl


8、ELISA實(shí)驗(yàn)封閉液：
牛血清白蛋白(BSA) 5g
加洗滌緩沖液至100ml
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。